0512-86860966
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前言
B 群鏈球菌(Group B
Streptococcus； GBS；Streptococcus
agalactiae)為一種革蘭 氏陽性球菌，常棲息于生殖泌尿道與腸胃道
的共生菌，通常帶菌者不會出現(xiàn)癥狀，但因 新生兒抵抗力較低，容易透過母親垂直感染， 是造成新生兒敗血癥之最大殺手；既使治愈
后依然會有約30%帶有神經(jīng)系統(tǒng)的后遺癥， 例如：聽力或是視力受損、學(xué)習(xí)與運動障礙 或是腦性麻痹等[1-2]。
目前衛(wèi)福部建議懷孕35-37周孕婦應(yīng)進 行篩檢，透過棉拭采檢陰道及直腸末端后，
接著把拭子接種在 Carrot broth、Lim broth或 Trans-Vag broth 中，若種在 Carrot broth 中于35-37℃的 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時
后，發(fā)現(xiàn)有胡蘿卜色即可發(fā)出 GBS 陽性報 告，若無則再移種至其他平板培養(yǎng)基；而種 在Lim broth或Trans-Vag broth中于35-37℃ 的 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時后，全部需劃
種于平板培養(yǎng)基，并再于35-37℃的 CO2 培 養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時后，若有疑似菌落再進 行鑒定試驗后才可發(fā)出報告[3]。 檢測GBS的流程中必需將檢體增菌后再 移種，目的為增加GBS的分離率[4]，而在臺 灣[2-4]及國外的研究[5]中有提及GBS的增菌培 養(yǎng)液可選用Carrot broth, Lim broth及 TransVag broth，而移種的培養(yǎng)基可選用 BAP、 CNA、CHROMagar StreptB及GBS DetectTM， 而在臺灣則有新設(shè)計的分離培養(yǎng)基-CMPTM Carrot
agar及 / GBS detection agar bi-plate [6-8]皆可以很方便地分離GBS。 Lim broth[5, 9]為含 colistin 及 nalidixic acid 之 Todd-Hewitt 培養(yǎng)液，可抑制革蘭氏 陰性桿菌的生長。也有研究報告顯示[11]，檢
體增菌后的GBS分離率優(yōu)于未增菌者，原因 可能是抑制其他陰道/直腸菌群，但此增菌方
法須經(jīng)過多次培養(yǎng)確認(rèn)，將會延遲報告[10]。 Trans-Vag
broth[5, 11]為含5%綿羊血、 gentamicin 及 nalidixic acid 之 Todd-Hewitt 培養(yǎng)液，大致上與 Lim broth 相同只差使用 的抗生素種類不同與額外添加5%綿羊血。 Gentamicin 和nalidixic acid可抑制部分革蘭 氏陰性菌，添加5%綿羊血目的為提供更佳的 營養(yǎng)分以增加GBS的生長。 CMPTM Carrot broth[5, 12]為一種液態(tài)增 菌/鑒別培養(yǎng)基，含 GBS 生長所需物質(zhì)及抑 制其它非鏈球菌的抗生素，并含少量瓊脂與 特殊養(yǎng)份促使 溶血型 GBS 顯色，陽性反應(yīng) 會產(chǎn)生胡蘿卜色。先前研究報告指出， -GBS 在Carrot broth產(chǎn)生胡蘿卜色具有100%的專 一性[13]，因此產(chǎn)色即可發(fā)出陽性報告[3]，可以減少再次移種所需的人力、物力。
雖然GBS在BAP的生長菌落大多呈 溶 血型（菌落周圍完全溶血），但仍有約3-5% 的菌落呈 溶血型（不溶血）且在Carrot broth 中不顯色，為能夠確切檢測出所有GBS，可 搭配使用GBS detection agar，相關(guān)研究報告 指出CMPTM / GBS detection agar及 Hardy GBS
DetectTM會誘導(dǎo) 溶血型GBS呈現(xiàn) 溶血 型，將可提高 溶血型 GBS 偵測的靈敏度與 分離率[14-15]。 本研究比較目前GBS檢測常用的三種增 菌培養(yǎng)液(Carrot broth, Lim broth 及 TransVag broth)的效能，除了測試此三種增增菌培 養(yǎng)液的偵測極限，也與三種常見產(chǎn)道棲息菌 混合接種，以了解GBS在偵測中可能受到的 干擾。
材料與方法
試驗菌株 本研究選用的測試菌株包括五株標(biāo)準(zhǔn)菌 種，Streptococcus agalactiae (ATCC
12386)、 Streptococcus agalactiae (ATCC13813)，Enterococcusfaecalis(ATCC29212)，Staphylococcus
aureus (ATCC 25923)與 Escherichia coli (ATCC 25922)。上述五種菌株皆保存在-70℃ 的 GermBank 菌種保存管（啟新生物科技公 司，新北市），試驗前取出接種在 BAP 于 35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時，共活 化兩次。
增菌培養(yǎng)液、移種培養(yǎng)基與試劑 本研究使用的增菌培養(yǎng)液包含 CMPTM Carrot broth、Lim broth及Trans-Vag broth， 以及移種培養(yǎng)基BAP與 CMPTM Carrot agar 及 / GBS detection agar之 bi-plate和系列 稀釋使用的Tryptic soy broth (TSB) 培養(yǎng)液， 皆由啟新生物科技有限公司（新北市，臺灣） 提供。
三種增菌培養(yǎng)液的偵測極限 分別將 與 -GBS用TSB調(diào)至McFarland no 0.5 (1.5×108 CFU/mL)，再進行10倍系 列稀釋至103-10 CFU/mL，并各取0.1 mL分 別接種在CMPTM Carrot broth、Lim broth及 Trans-Vag broth中（實際接種菌量為102-100 CFU），接種完后，置于35-37℃的 CO2 培 養(yǎng)箱培養(yǎng)，18-24小時后觀察每一增菌液的
顏色變化，再以四區(qū)及三區(qū)劃線分別移種于 BAP與CMPTM Carrot
agar及 / GBS detection agar之bi-plate，并于35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱 培養(yǎng)18-24小時，觀察菌落是否生長與是否
有胡蘿卜色及溶血菌落的產(chǎn)生。
三種增菌培養(yǎng)液的干擾試驗 依照上述實驗得到GBS在各增菌培養(yǎng)液 中的偵測極限，再分別將Enterococcus faecalis (ATCC 29212)，Staphylococcus
aureus (ATCC 25923)與 Escherichia coli (ATCC 25922)利
用TSB調(diào)至相當(dāng)于McFarland no 0.5標(biāo)準(zhǔn)液， 并進行十倍系列稀釋，將
與 -GBS固定菌量 104 CFU，和其余三種干擾菌分別以10:1、 1:1、1:10之比例混合，然后都取0.1 mL 分 別接種于CMPTM Carrot broth、Lim broth及 Trans-Vag broth 中，接種完后置于35-37℃ 的 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時，待增菌后觀
察每一增菌液的顏色變化，再以四區(qū)及三區(qū) 劃線分別移種于BAP與 CMPTM
Carrot agar 及 / GBS detection agar 之 bi-plate，并于 35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時，觀察 菌落是否生長與是否有胡蘿卜色及溶血菌落 的產(chǎn)生。
結(jié)果 與 -GBS在三種增菌培養(yǎng)液的偵測極限 將 102-100 CFU的 與 -GBS分別接種在 Carrot
broth、Lim broth及Trans-Vag broth，
并于35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時后觀察顏色變化，并接種在CMPTM Carrot agar 及 / GBS detection agar 之 bi-plate，于 35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時后觀察
培養(yǎng)基上的菌落顏色及形態(tài)。 -GBS： -GBS 于 Carrot broth 中在菌 量高于10 CFU 時皆產(chǎn)生胡蘿卜色，偵測率
皆為100% (3/3)，不過若是菌量為1 CFU時 則沒有顯色，不過卻在 CMPTM Carrot agar 及 / GBS detection agar之 bi-plate中有其 中兩片產(chǎn)生胡蘿卜色菌落，偵測率降低為 66.7% (2/3)；在 Lim broth 中，當(dāng)菌量高于 10 CFU時，偵測率為100% (3/3)，若是菌量 為 1 CFU時則降低為0% (0/3)；在Trans-Vag broth中，當(dāng)菌量高于10 CFU時，偵測率為 100% (3/3)，若是菌量為1 CFU時則降低為 66.7% (2/3)。（表1） -GBS： -GBS 于 Carrot broth 中在菌 量高于10 CFU時的偵測率皆為100% (3/3)， 不過若是菌量為1 CFU時則降低為33.3% (1/3)；在Lim broth中，當(dāng)菌量高于10 CFU 時，偵測率為66.7% (2/3)，若是菌量為1 CFU時則降低為0% (0/3)；在Trans-Vag
broth 中，當(dāng)菌量高于10 CFU時，偵測率為100%
(3/3)，若是菌量為1 CFU時則降低為33.3%
(1/3)。（表1）
與 -GBS在三種增菌培養(yǎng)液的干擾試驗 本研究將Enterococcus
faecalis，Staphylococcus aureus與Escherichia
coli以 10:1、 1:1、1:10之比例分別與 與 -GBS 混合，并 接種在Carrot broth、Lim broth及Trans-Vag broth 并于35-37℃的 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24 小時后觀察顏色變化，并接種在CMPTM Carrot agar 及 / GBS detection agar 之 bi-plate， 并于35-37℃的CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時后 觀察培養(yǎng)基上的菌落顏色及形態(tài)。 -GBS： -GBS 于 Carrot broth 中與其
他三種菌以三種比例混合培養(yǎng)后，其中，與S. aureus 與 E.coli 混合的三種比例皆100% (3/3)產(chǎn)生胡蘿卜色，而與E. faecalis以 10:1 或是1:1混合也不會干擾到胡蘿卜色產(chǎn)生， 不過若是 -GBS與E. faecalis以 1:10混合的 話則不產(chǎn)生胡蘿卜色(0/3)，必需接種到CMP
TM Carrot agar及 / GBS detection agar之 bi-plate后，才在其中一片培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)胡蘿 卜色的菌落(1/3)。此外， -GBS 于Lim broth 及Trans-Vag
broth中與其他三種雜菌混合培 養(yǎng)之后，S. aureus與 E.coli也不會干擾到 GBS的偵測，偵測率為100%
(3/3)，只有當(dāng) -GBS 與 E. faecalis 以 1:10混合才會影響到 其偵測的能力，偵測率分別為0% (0/3)及 66.7% (2/3)（表2）。 -GBS： -GBS 的實驗結(jié)果與 -GBS 相
似，在Carrot broth、Lim broth及Trans-Vag broth 中，S. aureus 與 E.coli 并不會干擾 GBS的偵測，只有 -GBS與 E. faecalis以 1: 10混合才會影響到其偵測的能力，偵測率分 別為33.3% (1/3)、0% (0/3)及 33.3% (1/3) （表2）。
討論
GBS常用的三種增菌培養(yǎng)液CMPTM Carrot broth, Lim broth及Trans-Vag broth，在之前 的研究報告皆有指出可有效增加GBS生長，
有助于 GBS 在平板培養(yǎng)基上的分離率[4-5]。 此次研究比較三種增菌培養(yǎng)基的效能，結(jié)果
指出三種增菌培養(yǎng)液對于 -GBS都可以100% 偵測到10 CFU 以上的菌量，若是 -GBS 為 1 CFU 時，Carrot broth 及 Trans-Vag broth 依然有66.7%的偵測率，不過Lim broth則為 0%（表1）。先前研究指出，Carrot broth對 于 -GBS 具有100%產(chǎn)生胡蘿卜色的專一性 [14]，而在本研究中觀察到當(dāng) -GBS菌量為10 CFU 以上時，Carrot
broth 皆可產(chǎn)生典型胡 蘿卜色，不過在菌量為1 CFU 時，Carrot broth卻不產(chǎn)色，需要移種至同樣能使 -GBS
產(chǎn)生胡蘿卜色的平板培養(yǎng)基后，才能鑒定 出 -GBS，這是由于當(dāng)菌量過低時， -GBS 在 Carrot broth 內(nèi)的分布不集中，因此即使 產(chǎn)色也無法輕易用肉眼觀察，此時只能增長
培養(yǎng)時間或是移種到平板培養(yǎng)基進行二次增 菌才可以觀測到 -GBS。啟新生物科技公司 所研發(fā)的 CMPTM GBS TransCultSwab 也具 有產(chǎn)生胡蘿卜色的能力，與 Carrot broth 不 同的地方在于CMPTM GBS本身即為采檢管， 在 35-37℃保存時能實時增菌，也因為其為 半固態(tài)培養(yǎng)基，更能讓檢體內(nèi)的GBS實時增
菌以及維持厭氧的環(huán)境，因此在臨床上的應(yīng) 用上比Carrot broth有更好的效能[16-19]。 對于 -GBS的偵測極限，Carrot broth及 Trans-Vag broth都可以100%的偵測到10 CFU 以上的菌量，若是菌量為1 CFU 時，只有 33.3%的偵測率。而Lim broth對于 -GBS的 偵測極限，當(dāng)菌量為10 CFU時為66.7%，1 CFU時為0%，這可能是由于Lim broth中所 含的養(yǎng)分相對于其他兩種增菌培養(yǎng)液較低，
因此Lim broth對于低菌量的增菌效果較差。 將Enterococcus
faecalis，Staphylococcus aureus 與 Escherichia coli 以 10:1、1:1、1: 10之比例分別與 與 -GBS混合進行GBS的 干擾試驗，經(jīng)由三種增菌培養(yǎng)液培養(yǎng)后，結(jié) 果顯示S. aureus與E. coli在任何比例下，均 不影響 與 -GBS的生長，是由于三種增菌液 中皆有添加特定的抗生素來抑制革蘭氏陰性 菌，還有除了鏈球菌以外的革蘭氏陽性菌。 不過針對 E. faecalis，當(dāng) E. faecalis 的菌量 高于 與 -GBS 10倍以上時，就會干擾GBS 的生長（表2），也間接影響 -GBS在Carrot
broth中的產(chǎn)色。 綜合上述研究結(jié)果，對GBS來說，CMP
TM Carrot broth及 Trans-Vag broth 具有較相 近的增菌能力，而 Lim broth 相較于其他兩 種增菌液，增菌能力顯然地較為不足。其中 Carrot
broth更具有產(chǎn)生胡蘿卜色的效能，一旦產(chǎn)色即可判定為 -GBS，不需要再移種至 其他培養(yǎng)基，可以省下更多的人力、物力以
及時效[16-18]。本次研究所用的三種增菌液接 對于臨床上的雜菌都具有一定的抑菌性，唯 一會造成影響的是 E. faecalis，不過由于 E. faecalis 在分類與結(jié)構(gòu)上都與 GBS 相近，因 此目前難以在培養(yǎng)的階段專一性地抑制E. faecalis.
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